PENGARUH
PEMBERIAN BAKTERI PROBIOTIK DALAM MEMPERBAIKI KUALITAS AIR
Effect of
Probiotic Bacteria In Improving Water Quality
oleh : ita apriani
Abstrak
Probiotik dalam akuakultur adalah mikroba hidup yang dapat menguntungkan
inang dengan cara memodifikasi asosiasi inang atau dengan meningkatkan nilai
nutrisi dan meningkatkan ketahanan inang terhadap penyakit.
Bioremediasi dengan menggunakan bakteri merupakan
salah satu alternatif yang telah banyak digunakan karena dianggap efektif dalam
meremediasi lingkungan yang tercemar. Sebelum probiotik dimasukkan, terlebih dahulu
dilakukan pengukuran kualitas air seperti DO, CO2, pH, TAN, nitrit,
dan nitrat. Pengukuran dilakukan beberapa kali saat probiotik telah dimasukkan,
pada hari ke-14 bakteri probiotik yang disebar didalam akuarium diambil untuk
dijadikan biakan agar dapat dihitung. Dari
berbagai perlakuan yang diujikan, dosis yang paling baik adalah perlakuan 5 ppm
karena dapat menurunkan kandungan nitrat hingga 1,780 ppm. Hal ini menunjukan
bahwa penggunaan bakteri probiotik mampu mereduksi nitrat secara signifikan.
Kata kunci:
Bioremediasi, Probiotik, Pencemaran
Pendahuluan
Semakin meningkatnya sistem budidaya menjadi
superintensif membawa konsekuensi yang merugikan bagi lingkungan budidaya itu
sendiri. Lingkungan budidaya menjadi tercemar bahkan akan mengancam kehidupan
ikan yang yang hidup didalamnya karena limbah membawa dampak yang buruk seperti
stress dan patogen yang dapat menginfeksi dan menyebabkan kematian pada ikan. Bioremediasi dengan
menggunakan bakteri merupakan salah satu alternatif yang telah banyak digunakan
karena dianggap efektif dalam meremediasi lingkungan yang tercemar. Penambahan
bakteri ke dalam wadah budidaya dapat mengurangi polutan-polutan seperti logam
berat, petroleum hidrokarbon, dan senyawa-senyawa organik terhalogenasi seperti
pestisida, herbisida, dan lain-lain. Kenyataan ini membuat para pembudidaya
dapat bernapas lega karena penggunaan bakteri merupakan alternatif yang efisien
dan efektif dalam penggunaannya serta biaya murah asal dengan penggunaan yang
tepat
Metodologi
Alat dan Bahan
Praktikum
ini dilakukan pada hari Rabu, 16 November 2011 – 30 November 2011 di
Laboratorium Lingkungan, Departemen Budidaya Perairan, Fakultas Perikanan dan
Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor.
Alat
yang digunakan pada praktikum kali ini adalah akuarium berukuran 60x35x35 cm,
selang aerasi, botol sampel, spektrofotometer, DO meter, pH meter, dan breaker
glass. Sedangkan bahan yang dipakai dalam praktikum ini adalah air sampel,
ikan nila, NED, sulfanilamid, chlorox, phenate, MnSO4, bruchin, H2SO4
pekat, PP, dan NaOH.
Prosedur Kerja
Langkah
pertama yang dilakukan, wadah yaitu akuarium dengan ukuran 60x35x35 cm
dibersihkan lalu diisi dengan air kolam sampai ketinggian air 14,5 cm. setelah
itu aerasi dinyalakan, bakteri probiotik disebarkan sesuai dengan dosis yang
telah ditentukan. Pada hari ke-4 ikan dimasukkan dalam akuarium.
Sebelum
probiotik dimasukkan, terlebih dahulu dilakukan pengukuran kualitas air seperti
DO, CO2, pH, TAN, nitrit, dan nitrat. Pengukuran dilakukan beberapa
kali saat probiotik telah dimasukkan, pada hari ke-14 bakteri probiotik yang disebar
didalam akuarium diambil untuk dijadikan biakan agar dapat dihitung.
Penghitungan koloni bakteri dilakukan dengan cara metode cawan gores.
Pengukuran
DO dan pH dilakukan dengan alat yang telah tersedia, seperti DO meter dan pH
meter. Sedangkan pengukuran CO2 dilakukan dengan menyiapkan 25 ml
air sampel, lalu diberi 2 tetes PP, apabila berubah menjadi warna pink tidak
perlu dititrasi, namun apabila tetap berwarna bening dilakukan titrasi dengan
NaOH sampai berubah menjadi warna pink.
Pengukuran
nitrit, 25 ml sampel diambil, lalu ditambahkan sulfanilamide sebanyak 5 tetes
setelah didiamkan selama 3 menit ditambahkan dengan 3 tetes NED, didiamkan 10
menit setelah itu dilakukan spektrofotometer dengan panjang gelombang 520 nm.
Pengukuran
nitrat, 5 ml air sampel diambil lalu ditambahkan dengan 0,5 bruchin setelah itu
dimasukkan H2SO4 pekat sebanyak 5 ml setelah dngin
dispektrofotometer dengan panjang gelombang 410 nm.
Pengukuran
TAN, 25 ml air sampel diambil lalu diteteskan 1 ml MnSO4, 0,6 ml
fenol, 0,5 ml Clorox lalu didiamkan selama 15 menit setelah itu
dispektrofotometer dengan panjang gelombang 630 nm
Hasil dan Pembahasan
Hasil
Tabel 1. Hasil pengukuran prebiotik pada
konsentrasi yang berbeda
Hari ke-
|
Per
akuan (ppm)
|
Parameter
|
|||||
pH
|
DO
|
CO2
|
TAN
|
Nitrat
|
Nitrit
|
||
0
|
K
|
8,48
|
7,05
|
7,99
|
0,19
|
0,71
|
0,03
|
5
|
8,48
|
7,05
|
7,99
|
0,19
|
0,71
|
0,03
|
|
10
|
8,48
|
7,05
|
7,99
|
0,19
|
0,71
|
0,03
|
|
15
|
8,48
|
7,05
|
7,99
|
0,19
|
0,71
|
0,03
|
|
3
|
K
|
8,49
|
6,40
|
39,95
|
0,38
|
0,48
|
2,50
|
5
|
7,62
|
7,75
|
15,98
|
0,44
|
1,64
|
1,50
|
|
10
|
5,31
|
4,70
|
19,97
|
0,46
|
2,64
|
4,94
|
|
15
|
4,85
|
4,80
|
59,92
|
0,53
|
9,27
|
7,86
|
|
5
|
K
|
8,32
|
4,60
|
5,99
|
1,37
|
41,0
|
125,69
|
5
|
7,89
|
1,50
|
13,98
|
5,52
|
216,41
|
101,33
|
|
10
|
7,70
|
4,00
|
11,98
|
6,03
|
311,83
|
152,69
|
|
15
|
7,61
|
1,65
|
13,98
|
3,46
|
416,31
|
164,05
|
|
7
|
K
|
8,49
|
7,70
|
15,98
|
0,18
|
25,14
|
65,52
|
5
|
8,54
|
8,20
|
15,98
|
0,51
|
1,78
|
4,63
|
|
10
|
8,33
|
7,70
|
19,97
|
0,48
|
4,51
|
11,75
|
|
15
|
8,13
|
8,00
|
39,95
|
0,84
|
2,63
|
3,16
|
Berdasarkan tabel 1
di atas pada hari ke-0 perameter yang diukur nilainya sama semua. Hari ke-3
pH yang tertinggi pada perlakuan kontrol
sebesar 8,490 dan nilai yang terkecil
pada perlakuan 15 ppm sebesar 4,850; parameter DO nilai yang tertinggi pada
pada 5 ppm sebesar 7,750 dan nilai yang terendah pada 10 ppm sebesar 4,700;
parameter CO2 yang tertinggi pada
perlakuan 15 ppm sebesar 59,928 dan nilai yang terendah pada perlakuan 5 ppm
sebesar 15,981; parameter TAN pada hari ke-3 nilai yang tertinggi pada
perlakuan 15 ppm sebesar 0.538 dan nilai terendah pada perlakuan kontrol
sebesar 0.384; pada parameter nitrat nilai yang tertinggi pada perlakuaan 15
ppm sebesar 9,275 dan nilai terendah pada perlakuan kontrol sebesar 0,480;
serta pada perlakuan nitrit nilai yang
terbesar pada perlakuan 15 ppm sebesar
7,861 dan yang terendah pada perlakuan 5 ppm
sebesar 1,5. Pada hari ke-5 parameter pH yang tertinggi pada perlakuan
kontrol sebesar 8,325 dan nilai terendah
pada perlakuan 15 ppm sebesar 7,610;
parameter DO nilai yang tertinggi pada padakontrol sebesar 4,6 dan nilai yang
terendah pada 5 ppm sebesar 1,5; parameter
CO2 yang tertinggi pada perlakuan 5 ppm dan 15 ppm sebesar 13,985 dan
nilai yang terendah pada perlakuan kontrol sebesar 5,99; parameter TAN pada
hari ke-5 nilai yang tertinggi pada
perlakuan 10 ppm sebesar 6,037 dan nilai terendah pada perlakuan kontrol
sebesar 1,379; pada parameter nitrat nilai yang tertinggi pada perlakuaan 15
ppm sebesar 416,331 dan nilai terendah pada perlakuan kontrol sebesar 41,045;
serta pada perlakuan nitrit nilai yang
terbesar pada perlakuan 15 ppm sebesar
164,056 dan yang terendah pada perlakuan 5 ppm
sebesar 101,330.Pada hari ke-7
parameter pH yang tertinggi pada perlakuan 5 ppm sebesar 8,545 dan nilai terendah pada perlakuan 15
ppm sebesar 8,135; parameter DO nilai
yang tertinggi pada pada 5 ppm sebesar 8,2 dan nilai yang terendah pada kontrol
dan 10 ppm sebesar 7,7; parameter CO2 yang tertinggi pada perlakuan 15 ppm
sebesar 39,952 dan nilai yang terendah pada perlakuan 5 ppm sebesar 15,981; parameter TAN pada hari
ke-7 nilai yang tertinggi pada perlakuan
15 ppm sebesar 0,841 dan nilai terendah pada perlakuan kontrol sebesar 0,182;
pada parameter nitrat nilai yang tertinggi pada perlakuaan kontrol sebesar
25,149 dan nilai terendah pada perlakuan 5 ppm sebesar 1,780; serta pada perlakuan
nitrit nilai yang terbesar pada perlakuan kontrol sebesar 65,528 dan
yang terendah pada perlakuan 15 ppm
sebesar 3,161.
eksplorasi dan seleksi aktivitasnya.
Probiotik efektif memenuhi beberapa kriteria
diantaranya adalah tidak patogenik dan
tidak toksik, mengandung sejumlah besar sel hidup, mampu bertahan dan melakukan
kegiatan metabolisme dalam usus, memberikan efek yang menguntungkan pada host,
tetap hidup selama dalam penyimpanan dan waktu digunakan, mempunyai sifat
sensori yang baik, diisolasi dari host. Dan efek kesehatan yang menguntungkan dari
probiotik adalah dapat memperbaiki keluhan malabsorsi laktosa, meningkatkan
ketahanan alami terhadap infeksi di usus, supresi kanker, mengurangi kadar
kolesterol darah, memperbaiki pencernaan, stimulasi imunitas gastrointestinal
(Anonim 2008).
Fungsi probiotik
dalam akuakultur adalah peningkatan produksi dengan penambahan (suplemen) ke
dalam pakan ikan budidaya, penggunaan Bacillus
sp. sebagai prebion dapat digunakan untuk memperbaiki kualitas air melalui
penyeimbangan populasi mikroba dan mengurangi penggunaan senyawa-senyawa kimia
dan meningkatkan pertumbuhan serta kesehatan hewan inang (Wang et al., 1999 dalam Irianto (2003). Aplikasi probiotik ada dua macam yaitu
melalui lingkungan (air dan dasar tambak) dan melalui oral (dicampurkan ke
dalam pakan).
Salah satu
anggota Actinomyces adalah Streptomyces yang
mampu membentuk
konidia (Madigan et al. 2006). Hifa
vegetatif bakteri ini berdiameter 0,5 - 2,0 µm, spora non-motil, dan menghasilkan berbagai macam
pigmen yang terlihat pada miselium vegetatif dan aerialnya. Dinding selnya
tersusun atas sejumlah besar asam L-diaminopimelat. Streptomyces adalah bakteri aerob, kemoorganotrof, memberikan
reaksi katalase positif, dan umumnya mampu mereduksi nitrat menjadi nitrit
(Holt et al. 1994
dalam Dhanasekaran et
al. 2005).
Bakteri ini
juga penghasil 2/3 dari seluruh hasil antibiotik yang telah ditemukan. Streptomyces memiliki siklus hidup yang
kompleks dan mampu menghasilkan dan mengsekresi metabolit sekunder, senyawa
bioaktif seperti antibiotik, enzim hidrolitik (protease dan lipase) dan
inhibitor enzim. Streptomyces biasanya hidup di tanah dan merupakan dekomposer
penting karena dapat menguraikan bahan organik, khususnya polimer seperti
lignoselulosa, pati, dan kitin dalam tanah, serta tahan terhadap stres lingkungan
seperti kekeringan dan kekurangan makanan dengan membentuk spora (Cao et al. 2004
dalam Dhanasekaran et
al. 2005).
Performans ikan sangat ditentukan
oleh kualitas air yang biasanya diukur dengan mengamati beberapa parameter
utama seperti faktor fisika (pH dan oksigen terlarut) dan faktor kimia (NH3,
NO2, dan TAN). Kualitas air yang buruk disebabkan oleh berbagai
faktor di antaranya meningkatnya timbunan bahan organik di dasar kolam yang
berasal dari ekskresi ikan, sisa pakan pabrik, pupuk organik maupun bangkai
ikan dan sampah budidaya lainnya. Fenomena itu akan diperparah oleh sistem
budidaya perikanan yang semakin intensif (tingkat padat penebaran tinggi) yang
memicu peningkatan stres ikan. Manajemen pengelolaan air yang baik sangat
diperlukan untuk tetap mempertahankan ekosistem yang mendukung usaha budidaya
(Anonim1 2011).
Probiotik diaplikasikan untuk
memperbaiki kondisi kualitas air dengan bertindak sebagai agen pengurai yang
ditebarkan secara langsung ke air. Probiotik akan bekerja secara eksternal yaitu
menguraikan senyawa toksik yang terdapat dalam air kolam seperti NH3,
NO3, NO2, juga menguraikan bahan organik, dan menekan
populasi alga biru hijau. Beberapa jenis mikroba sebagai probiotik pengurai
antara lain Nitrosomonas, Cellumonas, Bacillus subtilus, dan Nitrobacter.
Praktikum yang dilakukan
menggunakan campuran dari bakteri Lactobacillus, Steptococcus, Actynomicetes dan
Yeast. Sebagai Actinomycetes tumbuh, mereka
membentuk filamen percabangan sel-sel yang menjadi jaringan untaian disebut
miselium, mirip dalam penampilan dengan miselium dari beberapa jamur.
Actinomycetes juga unik dalam cara mereka membentuk spora dan dalam produksi
berbagai antibiotik. Sejauh ini genus paling sukses dalam kelompok ini adalah
Streptomyces dengan lebih dari 500 spesies.
Spesies
Streptomyces ditemukan di seluruh dunia di dalam tanah dan penting dalam
ekologi tanah. Sebagian besar bau karakteristik tanah bumi timbul dari bahan
kimia yang disebut geosmens yang dilepaskan oleh spesies Streptomyces.
Streptomycetes secara metabolisme beragam dan dapat "makan" hampir
semua hal, termasuk gula, alkohol, asam amino, asam organik, dan senyawa
aromatik. Hal ini dicapai dengan memproduksi enzim hidrolitik ekstraselular.
Hal ini menyebabkan adanya ketertarikan dalam penggunaan organisme ini sebagai
agen untuk bioremediasi (Anonim2 2011).
Pada dasarnya penetapan yang
terukur pada saat penetapan kandungan amoniak dalam air adalah total ammonium nitrogen (TAN), sedangkan
nilai kandungan amoniak dihitung berdasarkan pH, suhu, dan salinitas air
(Muliani 2004). Kandungan amoniak pada aplikasi probiotik 5 hingga 15 ppm
(Tabel 1) pada hari pertama cukup tinggi yaitu sebesar 0,196 mg/L. Hal ini
diduga karena probiotik yang baru diaplikasikan belum berfungsi dengan baik.
Namun, pada sampling berikutnya yang diharapkan mengalami penurunan tetapi
hasilnya menunjukkan peningkatan hingga hari kelima sebesar 6,037 ppm. Hal ini
diduga karena kandungan probiotik yang diberikan pada akuarium tidak berfungsi
optimal sehingga kandungan amoniak pada akuarium makin meningkat. Kandungan
amoniak yang normal untuk pertumbuhan pada wadah akuarium menurut Muliani
(2004) adalah di bawah 0,012 ppm, sehingga wadah akuarium tersebut tidak layak
untuk kegiatan pemeliharaan ikan.
Grafik 6 menunjukkan bahwa
secara umum nitrit pada semua perlakuan mengalami peningkatan secara
signifikan, terutama pada hari kelima sebesar 164,056 ppm pada perlakuan 15
ppm. Tingginya kandungan nitrit pada semua perlakuan menunjukkan bahwa bakteri
probiotik tersebut belum bekerja dengan sempurna. Pada hari ketujuh justru
kandungan nitrit mengalami penurunan hingga 3,161 ppm pada perlakuan 15 ppm.
Hasil penurunan kandungan nitrit masih di atas ambang normal untuk kegiatan
pemeliharaan ikan yaitu di bawah 0,2 ppm. Penurunan kandungan nitrit yang
secara signifikan menunjukkan bahwa bakteri probiotik bekerja dengan baik. Hal
ini menunjukkan bahwa aplikasi bakteri probiotik mampu mengendalikan
peningkatan kandungan nitrit pada akuarium setelah hari ketujuh.
Grafik 5 menunjukkan bahwa
secara umum nitrat pada semua perlakuan juga mengalami peningkatan secara
signifikan, terutama pada hari kelima sebesar 416,311 ppm pada perlakuan 15
ppm. Tingginya kandungan nitrat pada semua perlakuan menunjukkan bahwa bakteri
probiotik tersebut belum bekerja dengan sempurna. Pada hari ketujuh justru
kandungan nitrat mengalami penurunan hingga 1,780 ppm pada perlakuan 5 ppm.
Penurunan kandungan nitrat yang secara signifikan menunjukkan bahwa bakteri
probiotik bekerja dengan baik. Hal ini menunjukkan bahwa aplikasi bakteri
probiotik mampu mengendalikan peningkatan kandungan nitrat pada akuarium
setelah hari ketujuh.
Grafik 2 menunjukkan bahwa
secara umum kandungan oksigen terlarut pada semua perlakuan juga mengalami
fluktuasi, sedangkan pada hari kelima kandungan oksigen terlarut mengalami
penurunan sebesar 1,500 ppm pada perlakuan 5 ppm. Rendahnya kandungan oksigen
terlarut pada semua perlakuan menunjukkan bahwa bakteri probiotik tersebut
menggunakan oksigen terlarut untuk bekerja dengan sempurna merombak bahan-bahan
organik yang terdapat pada air akuarium. Pada hari ketujuh justru kandungan
oksigen terlarut mengalami kenaikan hingga 8,000 ppm pada perlakuan 5 ppm.
Kenaikan kandungan oksigen terlarut yang secara signifikan menunjukkan bahwa
bakteri probiotik telah bekerja dengan baik sehingga kandungan oksigen terlarut
meningkat kembali seiring dengan pengurangan penggunaan oksigen terlarut oleh
bakteri probiotik. Hal ini menunjukkan bahwa aplikasi bakteri probiotik mampu
peningkatan kandungan oksigen terlarut pada akuarium setelah hari ketujuh.
Kesimpulan
Bioremediasi secara biologi dengan
menggunakan bakteri probiotik pada berbagai jenis perlakuan menunjukan hasil
yang tidak berbeda nyata dengan kontrol. Namun, dari berbagai perlakuan yang
diujikan, dosis yang paling baik adalah perlakuan 5 ppm karena dapat menurunkan
kandungan nitrat hingga 1,780 ppm. Hal ini menunjukan bahwa penggunaan bakteri
probiotik mampu mereduksi nitrat secara signifikan.
Ucapan terima kasih
Ucapan terima kasih
kami ucapkan kepada Allah SWT dan Nabi Muhammad SAW, karena dengan rahmatnya
kami dapat menyelesaikan laporan ini dengan sebaik baiknya, taklupa kami
ucapkan kepada dosen yang telah memberikan ilmu, terima kasih juga kepada
kakak-kakak asisten yang telah membantu dalam praktikum, kepada rekan satu tim
yang telah berusaha untuk kelancaran praktikum ini, penanggung jawab praktikum
yang telah disibukkan untuk memberikan informasi dan semua pihak yang membantu
untuk menyelesaikan laporan dengan sebaik-baiknya.
Daftar Pustaka
Anonim.
2008. Actinomyces. http://www.enotes.com/actinomyces-reference/actinomyces. [6 November 2011].
Anonim. 2008. Probiotik, Prebiotik dan Sinbiotik.
http://www.keluarga-organik.com/node/12
[21 Mei 2011]
Anonim1. 2011. Probiotik Meningkatkan
Hasil Perikanan. http://www.biojanna. com/probiotik -meningkatkan-
hasil-perikanan.html. [6 November 2011].
Anonim2.
2011. Streptomyces.
http://www.microbiologybytes.com/video/ Streptomyces.html. [6 November 2011].
Anonim3.
2011. Streptomyces.
http://www.microbiologybytes.com/video/ Streptomyces.html. [6 November 2011].
Dhanasekaran D et
al. 2005. Biological Control of Tomato Seedling Damping-off with Streptomyces sp. J Plant Panthol 4(2):
91-95.
Irianto,
A. 2003. Probiotik Akuakultur. Cetakan I. Penerbit Gadjah Mada University
Press. Bulaksumur Yogyakarta. 125 pp
Madigan MT, Martinko JM, Parker J. 2006. Brock: Biologi Microorganism. New Jersey
American: Prentice Hall.
Muliani,
Nurbaya, Atmomarsono, M.,& Tompo. A. 2004. Eksplorasi Bakteri Tambak dari Tanaman Mangrove
sebagai Bakteri Probiotik pada Budidaya Udang
Windu Paneus monodon. Laporan Hasi Penelitian. Balai
Riset Perikanan Budidaya Air Payau. 18 hal.
Sabaratnam S, James AT. 2002. Formulation of a Streptomyces biocontrol agent for the
Supression of Rhizoctonia damping-off
in Tomatto transplants. Biol Con 23:
245-253.
Verschuere
Laurent, Geert Rombaut, Patrick Sorgeloos, Willy Verstraete.2000. Probiotic Bacteria
as Biological Control Agents in Aquaculture.Microbiol Mol Biol Rev 64:655-671
viagra online buy cheap viagra online australia - buy viagra online ehow
BalasHapusxanax online xanax bars online pharmacy - xanax .75 mg a day
BalasHapusbuy tramadol online buy tramadol online missouri - tramadol dosage in elderly
BalasHapusbuy tramadol online tramadol 50mg is it a narcotic - buy tramadol for dogs
BalasHapusbuy tramadol online buy cheapest tramadol - can you buy tramadol over the counter in usa
BalasHapusbuy tramadol hcl tramadol withdrawal symptoms usa - buy tramadol online with visa
BalasHapuscarisoprodol 350 mg soma carisoprodol tablets - carisoprodol pharmacy
BalasHapusbuy tramadol online buy tramadol 200 - half life tramadol 50mg
BalasHapusxanax online xanax side effects for elderly - get generic xanax uss
BalasHapusbuy tramadol online buy tramadol online from usa - tramadol hcl purchase
BalasHapusbuy cheap tramadol tramadol for dogs taken by humans - online apotheke holland tramadol
BalasHapusbuy cialis online best place buy cialis online us - cialis online in the usa
BalasHapusxanax online quit xanax withdrawal - s 90 3 xanax bars
BalasHapusbuy tramadol online order tramadol online 100mg - can i buy tramadol over the counter in the usa
BalasHapuscialis online cialis daily kaufen - buy cialis dapoxetine
BalasHapusbuy tramadol online maximum dosage tramadol 50mg - buy tramadol online overnight usa
BalasHapuscheap cialis 20mg order cialis online - cheap cialis rx
BalasHapuscheapest cialis buy viagra cialis online usa - cialis informacion en espanol
BalasHapusbuy cialis online cialis 30 oral suspension - buy cialis cheap usa
BalasHapusbuy cialis online cialis online south africa - coupon for cialis daily
BalasHapusbuy tramadol online tramadol dosage horses - tramadol hcl 50 mg what is it used for
BalasHapusbuy tramadol where to buy tramadol cheap - does tramadol 50mg look like
BalasHapusbuy tramadol cod next day delivery legal purchase tramadol online - where to buy tramadol online legal
BalasHapuslearn how to buy tramdadol tramadol discount coupons - tramadol online no prescription usa
BalasHapushttp://landvoicelearning.com/#63987 tramadol online us - buy tramadol online paypal
BalasHapuslearn how to buy tramdadol tramadol 25mg tablets - tramadol hcl 50mg tab for dogs
BalasHapusbuy tramadol tramadol hcl generic ultram - buy tramadol usa pharmacy
BalasHapusbuy tramadol online tramadol hcl 50 mg abuse - tramadol withdrawal bloating
BalasHapushttp://landvoicelearning.com/#74967 2 50mg tramadol - tramadol addiction helpline
BalasHapusbuy tramadol online cheap tramadol without prescriptions - tramadol 50mg vs lortab 10mg
BalasHapusbuy tramadol tramadol hydrochloride 50mg tablets - tramadol effects
BalasHapushttp://buytramadolonlinecool.com/#63102 tramadol 50 mg is equal to - how to order tramadol online no prescription
BalasHapusbuy ativan online ativan withdrawal how long does it take - i need to buy ativan where
BalasHapuslorazepam 1mg generic ativan india - generic for ativan lorazepam
BalasHapusbuy tramadol online tramadol hcl 10 mg - buy tramadol online us pharmacy
BalasHapusbuy tramadol in florida tramadol hcl what does it do - buy tramadol online us
BalasHapusbuy tramadol online overcoming tramadol addiction - tramadol hcl 50 mg pill identifier
BalasHapusbuy xanax online xanax and pregnancy - xanax effects contraceptive pill
BalasHapusIn Word 2003, leave All selected and choose decals. instructions http://pixocool.com photo printing online The best alternative to Printing postage at home.
BalasHapusYoung children read environmental print even without the envelope being opened. Working with your Stickerser helps you to replace the prize that was taken from him. quit [url=http://pixocool.com/stickers] stickers[/url] quality cheap prices Conveniently located in the Midwest, they will create for millions of consumers to have classic designs for their labels.
Your oωn аrtіcle offers confirmed
BalasHapusbenefіcial to us. It’ѕ extremely useful
and you are naturally extremely experienced in this гegion.
You get οрenеd up my sight foг you
to variouѕ oρinion of this sрecifiс topic using inteгesting аnd reliable content.
my webpage klonopin
Your own poѕt pгoviԁes ρroven hеlpful tο me.
BalasHapusIt’s ѵeгy useful and уou аre ceгtainly
quitе knoωleԁgeablе in this fielԁ.
You have gоt opеned our eye for уou tο vaгious οріnion of this specіfiс
matter uѕing intгіguing, notable and reliаble wгіtten contеnt.
Lοοk аt my weblog: ambien