HISTOPATOLOGI IKAN

HISTOPATOLOGI IKAN

oleh : Ita Apriani

1. Apa fungsi, komposisi, kelebihan dan kekurangan dari larutan carnoy, davidson, BNF, bouins ? dan larutan mana yang paling efektif ?

Jawab :

-          Larutan Bouins

                        Menurut Jusuf (2009) Larutan fiksatif ini mengandung larutan asam pikrat             jenuh. Asam pikrat merupakan zat berbentuk serbuk bewarna kuning seperti kunyit         dan mudah meledak dalam keadaan kering, sehingga harus disimpan dalam keadaan        lembab. Asam pikrat jenuh dibuat dengan cara melarutkan serbuk asam pikrat dalam        air hingga jenuh (terdapat endapan serbuk pikrat di dasar larutan.

                        Asam pikrat mempresipitasikan protein dengan cara membentuk ikatan pikrat-        protein. Asam pikrat menyebabkan sel darah merah menjadi rusak, seringkali         menghilangkan Fe+3, terutama bila berada dalam jumlah sedikit dan dapat         melindungi RNA dari proses perusakan oleh ensim ribonuklease.

            Kelebihan dari larutan Bouin adalah :

1.      Mempunyai daya penetrasi yang cepat dan merata, tetapi dapat menyebabkan  terjadinya sedikit pengerutan. Untuk mengatasi hal ini ke dalam larutan Bouin  biasanya di tambahkan asam asetat glasial sesaat sebelum dipakai. Waktu fiksasi cepat yaitu 24 jam, tetapi potongan kecil dengan ketebalan kurang dari 2-3 mm dapat selesai di fiksasi dalam 2-3 jam. Asam asetat glasial sendiri mempunyai kemampuan untuk fiksasi meskipun rendah. Asam asetat glasial biasanya digunakan bersama-sama dengan larutan fiksatif lain dan berfungsi untuk meniadakan pengerutan yang disebabkan oleh larutan lainnya. Nukleoprotein dipresipitasi oleh asam asetat dan sering ditambahkan pada zat warna hematoksilin agar inti tampak jelas dan tajam.

2.      Memberikan warna cemerlang bila diwarnai dengan metoda trichrome.

3.      Sangat baik untuk memperlihatkan inti sel seperti pada sel benih di testis dan ovum.

            Kekurangan dari larutan Bouin adalah :

1.      Jaringan yang difiksasi dengan larutan Bouin harus segera dilakukan proses dehidrasi setelah 24 jam. Bila jaringan direndam terlalu lama (>24 jam) dapat menyebabkan kerapuhan pada jaringan sehingga tidak mungkin untuk dipotong dengan mikrotom secara baik.

2.      Warna kuning pada jaringan akibat kelebihan pikrat. Untuk menghilangkan warna kuning, jaringan harus dicelup dalam alkohol atau dengan mencucinya dalam air kran semalam. Oleh karena terbentuk beberapa ikatan pikrat yang larut dalam air, jaringan harus segera dipindahkan ke dalam alkohol

             Formula larutan fiksatif  Bouin adalah

              Larutan asam pikrat jenuh  .........................................................................  12.5 gram

              Formalin 10% (40% formaldehida) ................................................................ 100 ml

              Bila akan digunakan baru tambahkan “ asam asetat glasial”  ........................... 5 ml

-          Larutan Carnoy

                        Larutan ini merupakan larutan fiksatif inti yang mempunyai daya penetrasi             yang    cepat.  Di samping itu larutan fiksatif ini juga akan mengawetkan substansia   Nissl dan glikogen. Keuntungan dari larutan Carnoy adalah sangat cepat . Fiksasi ini         sering digunakan apabila suatu diagnostik perlu ditegakkan dengan cepat, misalnya            pada bagian bedah untuk diagnostik sel kanker. Fiksasi umumnya selesai setelah 1-            2jam,sedangkan potongan kecil selesai difiksasi dalam 15 menit (Jusuf, 2009).

                        Kekurangan fiksasi ini adalah efek pengerutan yang kuat dan menghancurkan        sebagian besar unsur sitoplasma lainnya. Efek pengerutan dapat dikurangi dengan melakukan fiksasi pada suhu nol derajat Celsius selama 18 jam.

            Formula larutan fiksatif Carnoy adalah :

            Alcohol absolut  .........................................................................................   60 ml

           Chloroform ................................................................................................    30 ml

            Glacial acetic acid  .......................................................................................  10 ml

2.  Tujuan memasukan preparat ke dalam waterbath pada proses pemotongan?

Jawab :

            untuk menghilangkan lapisan parafin yang ada, dan paraffin terlihat mengembang. (Anggie, 2008).

3. Fungsi dan prinsip kerja Mikrotom?

Jawab :

            Mikrotom merupakan perangkat penting dalam persiapan mikroskop, memungkinkan untuk persiapan sampel untuk pengamatan di bawah cahaya yang ditransmisikan atau radiasi elektron. Mikrotom menggunakan pisau baja atau kaca  tergantung pada spesimen yang diiris dan ketebalan yang diinginkan dari bagian yang dipotong. Pisau baja digunakan untuk mempersiapkan bagian dari jaringan hewan atau tanaman untuk histologi mikroskop cahaya.

            Pisau kaca digunakan untuk mengiris bagian untuk mikroskop cahaya dan untuk mengiris bagian sangat tipis untuk mikroskopi elektron. Tingkat industri berlian pisau yang digunakan untuk mengiris bahan-bahan keras seperti tulang, gigi dan materi tanaman untuk kedua mikroskop cahaya dan mikroskop elektron. Gem kualitas berlian pisau yang digunakan untuk mengiris bagian tipis untuk mikroskopi electron. Microtom adalah metode untuk membuat irisan tipis suatu bahan seperti daging, insang, usus, dan dan lain-lain untuk pengamatan histopatologi.

4. Mengapa waktu dehidrasi dilakukan secara bertahap, dari konsentrasi rendah ke konsentrasi tinggi?

Jawab :

            dehidrasi dengan menggunakan alkohol bertingkat dengan konsentrasi mulai dari 40%, 60%, 80%, 95%, dan 100%, fungsi dari dehidrasi adalah untuk menghilangkan kandungan air dari jaringan Ricinus comunis tersebut sehingga dapat dikenakan larutan yang dapat bercampur atau larut dalam paraffin dimana bahan akan ditanam. Digunakan alkohol bertingkat tersebut agar kandungan air dalam jaringan dapat keluar sedikit demi sedikit hingga pada konsentrasi 100% pengeluaran airnya pun maksimal.

5. Kenapa pada saat rehidrasi dilakukan perendaman alkohol dari konsentrasi tinggi ke konsentrasi rendah?

Jawab :

            Pewarnaan dilakukan setelah parafin pada sayatan dilarutkan dengan xilol karena tidak dapat mengikat air, sedangkan pewarnaan mengikat air. Setelah itu, sayatan direhidrasi dengan alkohol bertahap (100%, 95%, 80%,70%) untuk mengkondisikan jaringan bisa dimasuki air. Dimasukkan dalam pewarna hematoksilin bertujuan untuk mewarnai inti sel (biru keunguan), sedangkan eosin untuk mewarnai sitoplasma menjadi merah muda.

Dapus :

Anggie, RS. 2008. Studi histopatologi insang, usus, dan otot ikan gurami (Osphronemus gourany) akibat infestasi parasit protozoa di desa carangpulang dramaga bogor. [skripsi]. Fakultas Kedokteran Hewan, Institut Pertanian Bogor.

Jusuf, AA. 2009. Histoteknik Dasar. Fakultas Kedokteran, Universitas Indonesia.